Técnicas de enumeración
Título de la práctica FECHA: 12/11/2019
Técnicas para la enumeración de microorganismos
Elaboró
Roldán Hernández Laura Mariana // López Jaimez Diana
Se determinó la cantidad de microorganismos de diferentes muestras a través de diferentes técnicas
de enumeración.
FILTRACIÓN
Se filtro una muestra de agua Santa María©️, y se sembró
en medio ENDO (selectivo y diferencial) y NKS (selectivo) para determinar presencia de
bacterias coliformes en la muestra.
Resultado
En ambas muestras al cabo de 48 horas no se hubo crecimiento.
NMP(Numero mas probable)
Prueba presuntiva: Se incubaron 10 mL de una muestra de agua en tubos con caldo lactosado doble concentración y se incubó
a 37°C 24 horas.
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| Muestra de agua utilizada. |
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| Resultado negativo en caldo lactosado doble concentración. |
i. Prueba confirmativa de microorganismos coliformes
totales: desde la cepa de E. coli se inoculo en caldo de bilis verde brillante y medio E.C. debido a que no hubo crecimiento, (presencia de turbiedad o gas atrapado en la campana de Durham).
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| Caldo verde brillante sin crecimiento. Incubación de 24 hrs 37°C. |
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| Medio caldo E.C. sin crecimiento. Incubación de 24 hrs, 44°C. |
CUENTA PLACA
Se hicieron 7 diluciones de una muestra de Yakult, se tomó 1 mL de las diluciones 10-⁵, 10-⁶ y 10-⁷y se recibió en un medio líquido general.
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| Placa con crecimiento, dilución 10-7. |
Resultado
3,348 x10 7 UFC/ mL
CUENTA BREED
La muestra para llevar acabo esta técnica es de vino tinto. Se busca levaduras.
Se midió el área de campo de 100x, el área de la muestra es de 1 cm cuadrado.
Tabla 1. Factor
microscópico (FM)
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Operación matemática
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Resultado
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Diámetro (micras)
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15 (0.1)
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0.15
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Radio (micras)
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0.15/2
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0.075
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Área (micras)
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(0.075)2 π
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0.018
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Área (cm2)
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0.018 / 100
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0.00018
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FM= 0.00018/1= 0.00018 cm2
Tabla 1.1 Conteo de microorganismos en cinco campos diferentes.
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Numero de campo
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Numero de microorganismos
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1
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90
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2
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150
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3
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120
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4
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150
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5
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90
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Promedio
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120
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Resultado
(promedio) (FM) (100) = # de microorganismos por mL.
120 (0.00018 cm2) (100) = 2/mL
MÉTODO REDOX
A 10 mL de leche bronca/pasteurizada (marca Alpura©️) con 1 mL de azul de metileno contenido en un tubo de ensayo se le sometió a baño maría y se monitorio el tiempo de reducción del azul de metileno.
Leche bronca: 1
Tabla 2. Resultados de reducción de a, metileno
por microorganismos presentes en una muestra de leche.
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Muestra
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Tiempo (min)
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Bronca
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40
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Pasteurizada
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Indeterminada
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| Tubo izquierdo leche bronca con azul de metileno reducido, tubo derecho con leche pasteurizada sin reducción. Interpretación de resultados
Resultado
Leche bronca: calidad mala, entre 4 y 20 millones de microorganismos por mililitro.
Leche pasteurizada: no se llegaron a dos horas en baño maría pero dado que en mas de una hora y media no se observó ninguna disminución de el colorante (azul de metileno), se determina que es de buena a excelente cálidad.
ANÁLISIS DE RESULTADOS
- NMP: el agua utilizada para esta practica dio un resultado negativo, por lo que se utilizo una cepa de E. coli, la cual presentó un comportamiento poco característico de ella, al no crecer en ninguno de los medios utilizados.
El equipo 5 tuvo resultados positivos en todas sus pruebas (crecimiento con gas en caldo lactosado doble concentración, crecimiento en medio verde brillante con gas y crecimiento en medio E.C. con gas) lo que nos indica que hay presencia de E.coli.
Por otra parte el equipo 10 tuvo crecimiento en dos de las pruebas (crecimiento con gas en caldo lactosado doble concentración, crecimiento en medio verde brillante con gas, pero no hubo crecimiento en el medio E.C.). En este caso se podría pensar que por los primeros resultados tendríamos E. coli, pero de acuerdo con las características de los medios utilizados, tanto en el medio verde brillante, como en el caldo lactosado puede crecer E. coli y Klebsiella pneumoniae, mientras que en el medio E.C. solo puede crecer E. coli, por lo tanto podríamos decir que se tiene en la muestra de agua a Klebsiella pneumoniae.
- CUENTA EN PLACA: Se obtuvo un resultado de 3,348 x10 7 UFC/mL lo cual nos indica que no se toma en cuenta la dilución ya que es incontable.
- CUENTA BREED: Se tomo una muestra de vino, pero no se encontraron levaduras sino bacterias, ya que el vino non estuvo el suficiente tiempo expuesto como para tener levaduras en el medio, debido a esto se calibro en un objetivo de 100x para poder contarlas, dando un resultado de 2UFC/mL, cabe destacar que no se tuvo una cuenta exacta, debido a que la mayoría de las bacterias estaban embebidas en cúmulos grandes incontables.
-MÉTODO REDOX: En la leche se estudia la actividad de la enzima reductasa generada por los microorganismos presentes cuya actividad aumente a medida que estos aumentan, y la enzima aldehído-reductasa componente de la leche, cuya actividad se utiliza para controlar el tratamiento térmico a que se ha sometido la leche. Por estos motivos esta prueba sirve para controlar tanto el estado higiénico, como el tratamiento térmico y la conservación de la leche. La parecencia de microorganismos en la leche y por su acción reductora, se puede calcular aproximadamente, una leche con un contenido bajo de microorganismos no modifica el color del azul de metileno o tardará mucho en hacerlo, en nuestro caso se obtuvo un tiempo de decoloración de 40min. en la leche bronca, lo cual indica que la la leche tiene mala calidad, por otro lado la leche pasteurizada utilizada tubo un tiempo mayor a 2h., lo cual indica que la leche es de buena calidad.
CONCLUSIONES
La cuenta y determinación de microorganismos es una labor de gran importancia en el ámbito de la salud publica, ya que permite garantizar la inocuidad de agua y alimentos evitando así epidemias gastrointestinales. Para ello se utilizan diversos métodos de conteo como se pudo observar en estas practicas, aun que algunos puedan parecer "antiguos" se siguen utilizando en la actualidad como recurso, como es el caso de la cuenta de Breed, ya que es un método de cuenta directa simple, fácil y eficaz, aunque mayormente se utiliza para la cuenta de levaduras.
Por otro lado el método de NMP es utilizado para la determinación de coliformes en muestras de agua, es fácil, confiable y rápida, a tal grado que existe una NOM para su realización e interpretación.
REFERENCIAS
10-19-95 NORMA Oficial Mexicana NOM-112-SSA1-1994, Bienes y servicios. Determinación de
bacterias coliformes. Técnica del número más probable.
http://cursos.quimica.unam.mx/pluginfile.php/3961/mod_folder/content/0/caldo%20lactosado%20verde%20brillante.pdf?forcedownload=1
http://cursos.quimica.unam.mx/pluginfile.php/3961/mod_folder/content/0/caldo%20EC.pdf?forcedownload=1 http://cursos.quimica.unam.mx/pluginfile.php/3961/mod_folder/content/0/caldo%20lactosado.pdf?forcedownload=1 https://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/38380/Eva%20Garc%C3%ADa.%20Calidad%20leche-2014.pdf Ramírez-Gama, R. M., B. Luna Millán, O. Velásquez Madrazo, L. Vierna García, A. Mejía Chávez, G. Tsuzuki Reyes, L. Hernández Gómez, I. Müggenburg, A. Camacho Cruz y M del C. Urzúa Hernández. 2006. Manual de Prácticas de Microbiología General. 5ª edición. Facultad de Química, UNAM. México. |
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