P7- Electrotransformación
Título de la práctica FECHA: 17/10/2019
Electrotransformación
Elaboró
Roldán Hernández Laura Mariana // López Jaimez Diana
En ciertas ocasiones en la practica profesional es necesario que los
microorganismo contengan y expresen características que originalmente no poseen por
lo que es necesario “añadirles” esta característica; esto se realiza mediante la
característica, existen metodologías para realizar lo anterior y una de ella es la
transferencia de genes hacia la bacteria lo cual culmina en la expresión de dicha
electrotransformación.
La cepa de E. coli se sometió a un proceso llamado “obtención de células
electrocompetentes” en el cual a las células se les preparó para que pudieran
resistir la electroporación y poder obtener el material genético.
Tabla 1. Resultados obtenidos del sembrado en diferentes medios a E.coli transformada.
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Medio BHI
(infusión de cerebro y corazon)
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Figura 1 E.
coli. transformada sembrada por estría radial y sometida a luz UV.
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Agar MacConkey
(Lactosa, bacilos Gram - )
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Figura 2. E. coli. transformada sembrada por estría radial, colonias color rosa/rojo (lo que
indica que es fermentadora de lactosa), colonias pequeñas, circulares,
convexas, con bordes enteros. Medio sometido a luz UV.
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Agar Luria con Ampicilina
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Figura 3. medio sin crecimiento de E. coli. transformada, indicando no resistente a ampicilina. Medio sometido a luz UV.
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Diagrama de flujo
A la cepa de E. coli se le insertó el plásmido pBABE-GFP el cual no le confirió resistencia a ampicilina pero sí se dio la codificación
para una proteína verde fluorescente (gen reportero).
Para comprobar la presencia del plásmido se realizó una
electroforesis, esto para constatar el tamaño aproximado
del plásmido en pares de base, el cual es de 5169.
Esta técnica
consiste separar fragmentos de ADN según su tamaño, las muestras de ADN se
cargan en pozos (ranuras) y se aplica una corriente eléctrica para arrastrarlas
a través del gel. Los fragmentos tienen carga negativa, por lo que se mueven
hacia el electrodo positivo. Puesto que todos los fragmentos de ADN tienen la
misma cantidad de carga por masa, los fragmentos pequeños atraviesan el gel más
rápido que los grandes. Cuando el gel se tiñe con un pigmento que se une al
ADN, los fragmentos pueden verse como bandas, las cuales representan un grupo
de fragmentos de ADN del mismo tamaño.
Figura 4. sistema de electroforesis.
Figura 5. Resultado de la electroforesis.
Figura 5. Resultado de la electroforesis.
E. coli
En el medio agar BHI se puede observar el crecimiento
abundante de colonias después de la electrotransformación, lo que nos indica
que es un microorganismo viable.
En el medio MacConkey, el color rosa/rojo nos indicó que es
una bacteria Gram negativa fermentadora de lactosa. Por lo que se puede
concluir para E. coli transformada coincide
con la literatura, ya que puede fermentar lactosa.
En el medio de agar luria con ampicilina, no se pudo obtener crecimiento , sin embargo, las colonias de los otros dos medios con la exposición a
luz UV fluorescen, se puede decir que el plásmido introducido no esta completo, que no se introdujo completamente en el proceso de electroporación.
Conclusión
La
electrotransformación es una
herramienta sumamente útil en el campo de la microbiología ya que
a partir de
ella podemos hacer
que una bacteria produzca
algún producto de
interés humano como un
antibiótico o principio activo,
lo cual
haría un proceso
más barato y
eficiente que obtenerlo de
manera normal. Es importante denotar que
mediante este método
no solo se puede
introducir DNA, sino también
proteínas e incluso aminoácidos, pero esto dependerá de para que se
requiere hacer la
transformación, en el marco
antes planteado se
introduce DNA si se
quiere que la progenie conserve la
característica en caso de
que no se
pueden introducir las proteínas, los aminoácidos o alguna
molécula de interés biológico en la célula.
Referencias
- - Ramírez,
R., Luna, B., et. All. (2013) “ Manual de Prácticas de
Microbiología General”, 6ª ed.;
Universidad Nacional Autónoma de México, México
- - Ingraham,
J.(1998) “Introducción a la microbiología”, 1ª
ed.; Reverté: España.
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